TGA实验室发布COVID-19 mRNA疫苗残留DNA与内毒素检测总结报告
Summary report of residual DNA and endotoxin on COVID-19 mRNA vaccines conducted by TGA Laboratories
TGA实验室对澳大利亚供应的两种mRNA疫苗Comirnaty（辉瑞）和Spikevax（Moderna）开展残留DNA与内毒素检测，结论为相关水平符合国际限值。
报告公开了TGA实验室对两种mRNA疫苗残留DNA与内毒素的检测方法、批次结果与判定限值，可供生物制品杂质控制参考。
执行摘要
治疗用品管理局（TGA）对澳大利亚供应的两种 mRNA 疫苗——Comirnaty（辉瑞）和 Spikevax（莫德纳）——中的残留 DNA 和内毒素水平进行了全面评估。本报告提供了科学证据，确认残留 DNA 和内毒素水平符合国际公认的限度。
TGA 对 COVID-19 疫苗的批签发流程包括全面审查和独立实验室检测，确保疫苗在到达公众之前其质量和安全性得到保障。截至 2024 年 10 月 24 日，TGA 实验室已放行 212 批 Comirnaty 和 Spikevax。本报告包含 TGA 实验室对残留 DNA 和内毒素进行独立检测的结果。
主要发现包括：
- 残留 DNA 检测：TGA 实验室检测了 28 批 mRNA 疫苗，确认所有批次均符合世界卫生组织推荐的每剂不超过 10 ng 的限度。这证实了生产工艺几乎去除了所有 DNA 起始材料，且疫苗处于安全的 DNA 残留限度之内。定量 PCR（qPCR）方法经过验证，以确保准确性和可靠性。
- 内毒素检测：在澳大利亚放行的两种 mRNA 疫苗的每一批均使用经过验证的鲎变形细胞裂解物（LAL）试验进行了细菌内毒素检测。内毒素检测水平为每毫升 5 个内毒素单位（EU），所有批次均低于该水平。
- 报告得出结论：经 TGA 评估和批准的现行 mRNA 生产工艺，能够有效将残留 DNA 和细菌内毒素水平控制在安全水平。
背景
世界卫生组织（WHO）认为批签发是确保疫苗质量和安全的关键流程[1]。该流程涉及在已许可疫苗投放市场之前对每一批次（或批号）进行评估。该流程通常由国家控制实验室（NCL）执行。评估包括对生产商生产数据和质量控制检测结果的全面审查。 根据 WHO 指南，检测是附加组成部分。
批签发的目的是确认每一批次在到达公众之前符合批准的放行标准。在澳大利亚，所有疫苗的批签发由 TGA 实验室执行，该实验室是澳大利亚治疗用品的国家控制实验室[2]。TGA 已在澳大利亚批准了两种针对严重急性呼吸综合征冠状病毒 2（SARS-CoV-2）的 mRNA 疫苗。这两种疫苗，Comirnaty（辉瑞）和 Spikevax（莫德纳），构成了目前在澳大利亚供应的 SARS-CoV-2 病毒疫苗的大多数。针对这些产品建立了检测，以确保关键质量属性由 TGA 独立验证。
截至 2024 年 10 月 24 日，TGA 实验室已在澳大利亚批签发 212 批 Comirnaty（154 批）和 Spikevax（58 批）。所有批次的汇总结果发布在 TGA 网站上。
本报告包含 TGA 实验室对这两种 mRNA 疫苗中两种生产杂质的独立检测的更详细结果。
- 残留 DNA 检测可能由生产商在最终制剂配制前进行。TGA 实验室已审查了生产商批放行信息中的残留 DNA 水平，或通过评估流程进行审查，以确保其符合批准的规格。迄今为止，TGA 还已检测了 28 批，以确认生产商提交的批次数据的准确性。
- 内毒素检测已纳入迄今为止所有已放行的 mRNA 疫苗各批次的批放行检测中。
残留 DNA
残留 DNA 含量的监测
残留 DNA 可能是生物制品中的一种杂质，可能存在于成品中。它最初是作为一种杂质被发现的，来源于用于生产重组蛋白的哺乳动物细胞培养系。它由来源于用于生产生物技术药品的宿主细胞的 DNA 片段组成，或者对于 mRNA 产品而言，由用于制造 mRNA 的模板质粒组成。生产商已开发并优化了生产控制措施，例如通过酶促 DNA 消化进行分解，然后进行纯化，以从这些制剂中去除 DNA。这在上市许可前由 TGA 进行评估。已为这些产品确立了高达每剂 10 ng 的安全残留 DNA 限值，以确保极高的安全边际[3][4]。
残留 DNA 检测可能由生产商在疫苗和其他生物制品生产的各个阶段进行。这些检测的可接受结果可保证生产工艺去除了几乎所有 DNA 起始材料，从而使残留水平低于科学界国际公认的水平。
在建立了能够持续生产出可比商业批次的生产工艺，且残留 DNA 水平被证明低于国际标准水平之后，残留 DNA 检测的要求可以安全地从放行检测流程中移除。考虑移除残留 DNA 检测应符合基于风险的监管原则。只有在监管机构已评估所提交的数据并有适当理由的情况下，才应移除检测。
尽管残留 DNA 检测可能未纳入批放行流程，常规监测仍可能进行。TGA 实验室已作为额外检查独立检测了这种生产杂质。该检测旨在监测纯化工艺去除残留 DNA 的有效性。
残留 DNA 检测
TGA Laboratories 进行的残留 DNA 测量符合欧洲药典专论 2.6.35《残留宿主细胞 DNA 的定量与表征》 中可用的残留 DNA 定量标准检测程序。该专论中收录的检测方法为定量 PCR（qPCR）。在该检测中，疫苗样品与以一系列已知浓度制备的参考物质（质粒 DNA）标准曲线进行比较。将检测样品的扩增与标准曲线物质的扩增进行比较，以定量疫苗中存在的残留 DNA 量，如下图 1 和图 2 所示。使用标准曲线并与检测样品的测量值进行比较是定量物质的标准方法。扩增量通过荧光报告基团进行监测，该报告基团可以是针对目标基因序列特异的染料标记 DNA 探针，也可以是双链 DNA 结合荧光染料。在后一种情况下，由 RNA 产生的任何背景荧光是一个恒定量，在观察到指数扩增曲线的后续循环中从荧光测量值中减去。背景荧光在如下图绿色和红色标记之间的循环中针对每个反应单独测量。反应荧光超过某一阈值的循环（扩增曲线与水平栗色线交叉处）即为样品阈值循环（CT）值，并与反应中最初存在的 qPCR 目标 DNA 量成正比。
来源：TGA 实验室检测报告 · tga.gov.au