Q：阴离子层析是如何实现蛋白纯化的？

A：膜过滤是基于膜的选择性，在压力驱动下，通过机械筛分等机制实现让溶剂和小分子通过，而把目标蛋白截留下来，从而实现蛋白溶液的初步纯化。

阴离子交换层析是基于填料的电荷选择性，去除与目标蛋白带电性质不同的分子。

Part 01结合洗脱去除杂质

1） 结合过程

阴离子交换层析填料就像一排带正电的“插座”，目标蛋白分子像带负电的插头，目标分子和填料基于电荷进行结合。

1.1中性分子、带正电分子不与填料结合，随上样液/流穿液走掉；

1.2带少量负电或构象暴露电荷少的杂蛋白，可能结合很弱，上样过程和随后低盐洗涤时也会走掉。

2） 洗脱过程

缓冲盐溶液中在冲洗填料的过程中，会将与填料结合的目标蛋白分子洗脱下来。

2.1低盐缓冲液洗涤/洗脱：上样后用低盐缓冲液冲，像把只轻轻搭在插座上的插头先碰掉，去掉的是弱结合杂质、非特异吸附的一部分杂蛋白等

2.2高盐缓冲液洗脱：高盐溶液的阴离子会去抢正电结合位点，从而将结合较强的杂质洗脱下来

不同蛋白对盐的敏感性不一样：

结合弱的杂质，低盐就先洗涤/洗脱下来；

目标蛋白，在某个盐浓度窗口下来；

结合更强的杂质，需要更高盐浓度，落在后段或洗脱液里

基于蛋白分子的性质，选择合适浓度的洗脱溶液和选择洗脱方式（梯度洗脱，等度洗脱，阶段洗脱），并对洗脱液进行分段收集，前峰丢掉、主峰收目标蛋白、后峰丢掉，通过这种“切窗”的方式去除洗脱杂质，收集目标蛋白，实现蛋白纯化。

Part02 常规阴离子层析过程

1）平衡

用低盐缓冲液把柱内反离子换成目标环境，调节好 pH、电导。

2）上样

目标带足够负电就会被结合不带电或带正电的分子流穿出去，实现纯化的效果

3）洗涤

低盐洗掉弱结合杂质，减少非特异吸附，实现纯化的效果

4）洗脱

逐步升高缓冲液等离子强度，或用 pH 梯度降低目标负电荷，使结合力弱的先下来、强的后下来，通过“切窗”的方式 收集目标蛋白，实现纯化的效果

5）再生/保存

高盐、稀碱或清洗液恢复柱容量并抑菌。