紫外可见分光光度计的原理、结构、操作与维护整理

一、工作原理

紫外可见分光光度法依据朗伯-比尔定律。

物质分子可以选择性吸收特定波长的紫外光、可见光。当一束固定波长的单色光穿过待测溶液时，溶液中待测组分吸收一部分光，光的强度会减弱。

在一定浓度范围内，吸光度与待测物浓度、光程长度成正比。

公式：A=εbc

A：吸光度；ε：摩尔吸光系数；b：光程；c：待测样品浓度。

通过测定吸光度，就可以完成样品的定性鉴别、定量检测。

二、仪器核心结构（5大部件）

1. 光源

提供稳定的入射光。紫外波段（190~400nm）使用氘灯；可见波段（400~800nm）使用钨灯。

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2. 单色器

把复合光分解成不同波长的单色光，筛选出检测需要的特定波长。

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3. 吸收池（比色皿）

盛放空白、对照品、样品溶液。石英比色皿紫外、可见光都能用；玻璃比色皿只可以用于可见光区，紫外区不能使用。

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4. 检测器

接收透过溶液的光信号，把光信号转换成电信号。

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5. 信号处理与显示系统

将电信号换算成吸光度、透光率，输出、保存数据。

👉【原理动画视频】

动画演示完整光路：光源发光→单色器分光→单色光穿过比色皿样品→透射光到达检测器，同步讲解朗伯比尔定律，可视化理解分子吸光过程。

三、标准操作步骤

1. 开机预热

接通电源，打开仪器，启动软件，氘灯、钨灯需要充分预热（一般20~30分钟），光源稳定之后再检测。

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2. 参数设置

在软件设置检测波长、扫描范围、采样模式（吸光度A /透光率T）。

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3. 装空白溶液做基线校正

将空白溶剂装入比色皿，放入样品池，执行空白调零/基线扫描，扣除溶剂、比色皿本身的吸收干扰。

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4. 样品检测

依次放入对照品溶液、供试品溶液，开始扫描或者单点测定，记录吸光度图谱与数据。

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5. 结束操作

测试完成，取出比色皿，清洗；关闭软件，依次关闭光源、仪器电源。

四、维护保养 & 使用注意事项

✅使用注意

1. 拿取比色皿，只能捏住磨砂面，禁止触碰透光面，手上油脂会污染、划伤透光面，影响检测。

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2. 溶液液面不要超过比色皿2/3，防止液体溢出腐蚀样品槽。

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3. 测试前检查溶液，不能有浑浊、气泡，气泡会造成吸收峰异常。

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4. 紫外检测必须使用石英比色皿，玻璃皿在紫外区有强吸收，数据无效。

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5. 检测过程不要随意打开样品室盖子，环境杂光干扰测定。

✅日常维护保养

1. 每次测试结束，立刻清洗比色皿：先用待测溶剂润洗，测试结束用纯水冲洗，必要时用稀酸/乙醇浸泡，不能用毛刷擦拭透光面；倒置放在滤纸上晾干。

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2. 样品池保持干燥洁净，若溶液溅出，及时用无尘软布擦拭干净。

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3. 仪器放置环境：避光、干燥，远离震动、热源、腐蚀性气体，控制温湿度。

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4. 光源有使用寿命，长期不用可以关闭氘灯、钨灯，延长灯的寿命；定期做仪器性能确认。

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5. 定期校验波长准确度、吸光度准确度、基线噪声等项目，满足GMP数据完整性要求。